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线粒体呼吸链复合物 I 活性比色法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)
点击次数:4187 发布时间:2014-03-31
 

YIJI 线粒体呼吸链复合物 I 活性比色法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)
主要用途
YIJI 线粒体呼吸链复合物 I(NADH-辅酶 Q 还原酶)活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成
辅酶 Q 同功类似物和特异性抑制剂,通过反应系统测定样品中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧
化后峰值的降低,即采用比色法测定样品中酶活性的而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心
研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线粒体样品(动物、人体、酵母)以及细胞或组织裂解悬液样
品的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)-辅酶 Q 还原酶的特异性活性检测。其用于衰老、能量代谢、
蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶,严格无菌,即到即用,操作简捷,性
能稳定,反应优化,检测敏感。
技术背景
线粒体呼吸链复合物I,通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶Q还原酶(reduced nicotinamide adenine
dinucleotide coenzyme Q reductase;NADH-CoQ reductase),又称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶
(reduced nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase;NADH dehydrogenase),是线粒体电子传递链中
zui大的结构成分:含有30至40多个多肽结构。其特征性的酶活性是鱼藤酮敏感的NADH-辅酶Q还原酶
(NADH:Q Reductase)。复合物I催化线粒体内电子由供体NADH传递到内膜上辅酶Q受体(泛醌;
ubiquinone)的能量转移反应,为整个呼吸链反应系统的*步。基于辅酶Q底物,在鱼藤酮存在与否的情
况下,通过NADH-辅酶Q还原酶的催化,转化成还原型泛醌(CoQH2),同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷
酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide;NADH)转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide
adenine dinucleotide;NAD),在分光光度仪下产生吸收峰值的变化(340nm 波长),由此定量测定NADH
-辅酶Q还原酶的特异活性。其反应系统是:
产品内容
YIJI 缓冲液(Reagent A)
YIJI 反应液(Reagent B)
YIJI 阴性液(Reagent C)
YIJI 底物液(Reagent D)
YIJI 专性液(Reagent E)
产品说明书
毫升
毫升
毫升
微升
微升
1份
保存方式
保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融;YIJI 反应液(Reagent B)含有毒性物质,避免直接用手接触;
YIJI 反应液(Reagent B)和 YIJI 底物液(Reagent D),避免光照,有效保证 6 月
用户自备
比色皿:用于比色分析的容器
1

双波长分光光度仪:用于比色分析
培养箱:用于孵育反应物
实验步骤
实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化;YIJI 反应液(Reagent B)和
YIJI 底物液(Reagent D)注意避光。然后进行下列操作。
一、 测定准备
1. 准备好待测样品(例如纯化线粒体样品等),置于冰槽里(注意:检测前溶解线粒体;参见注意事项 5)
2. 设定好双波长分光光度仪(温度为 30℃):波长分别为 340nm 和 380nm,间隔 30 秒,读数 7 次(共 3
分钟),并置零(注意:参见注意事项 11)
二、 背景对照测定
1. 移取 xx 微升 YIJI 缓冲液(Reagent A)到新的比色皿
2. 加入 xx 微升 YIJI 反应液(Reagent B)
3. 加入 xx 微升 YIJI 底物液(Reagent D)
4. 放进 30℃培养箱里静置 3 分钟
5. 加入 xx 微升 YIJI 阴性液(Reagent C)
6. 上下倾倒数次,混匀(限定在 3 秒之内)
7. 即刻放进分光光度仪检测,此为背景空对照:
(340 波长读数-380 波长读数)0 分钟-(340 波长读数-380 波长读数)1 分钟或 3 分钟
三、 样品总活性测定
1. 移取 xx 微升 YIJI缓冲液(Reagent A)到新的比色皿
2. 加入 xx 微升 YIJI反应液(Reagent B)
3. 加入 xx 微升 YIJI 底物液(Reagent D)
4. 放进 30℃培养箱里静置 3 分钟
5. 加入 xx 微升待测样品(注意:10 微克总线粒体蛋白;样品须溶解;参见注意事项 5)
6. 上下倾倒数次,混匀(限定在 3 秒之内)
7. 即刻放进分光光度仪检测,此为样品总活性读数:
(340 波长读数-380 波长读数)0 分钟-(340 波长读数-380 波长读数)1 分钟或 3 分钟
四、 样品非特异活性测定
1. 移取 xx 微升 YIJI缓冲液(Reagent A)到新的比色皿
2. 加入 xx 微升 YIJI反应液(Reagent B)
3. 加入 xx 微升 YIJI专性液(Reagent E)
4. 加入 xx 微升 YIJI底物液(Reagent D)
5. 放进 30℃培养箱里静置 3 分钟
6. 加入 100 微升待测样品(注意:10 微克总线粒体蛋白;样品须溶解;参见注意事项 5)
2

7. 上下倾倒数次,混匀(限定在 3 秒之内)
8. 即刻放进分光光度仪检测,此为样品非特异活性读数:
(340 波长读数-380 波长读数)0 分钟-(340 波长读数-380 波长读数)1 分钟或 3 分钟
五、 计算样品活性
1)样品活性(总活性或非特异活性)
【(样品读数-背景读数)
单位=微摩尔 NADH/分钟
=单位/毫升÷(样品蛋白浓度)毫克/毫升=单位/毫克
2)样品特异活性
样品总活性测定-样品非特异活性测定=样品特异活性
注意事项
1. 本产品为 21 次(10 个样本)操作,包括背景对照测定
2. 操作时,须戴手套
3. YIJI反应液(Reagent B)含有毒性物质,避免直接用手接触
4. 系统操作过程中,背景测定只需 1 次
5. 线粒体样品检测前,须溶解;建议冻存融解(-70℃至 37℃)循环 3 次或使用 YIJI线粒体溶解
试剂盒-GMS10018
6. 加入样品启动反应后 3 秒内即刻比色测定
7. 通常反应 1 分钟后比色测定值趋于稳定;测定值由高到低变化;测定可以持续 3 分钟
8. 测定值由高到低变化,即 3 分钟测定读数低于 0 分钟测定读数,表明有酶活性
9. 比色测定后,比色皿须清洗彻底
10.通常比色测定的 OD340 起始读数 0.5 为理想状态
11.如果用户没有双波长同步测定分光光度仪,可以使用单波长 340nm 替代,注意活性计算时,毫摩尔吸
光系数变成 6.2
12.建议待测样本线粒体蛋白浓度为 10 微克/100 微升;如果样本酶活性过低或过高,则可以增加或降低样
本量;注意计算公式的调整(本公司提供 YIJI线粒体溶解试剂盒 GMS10018 为后续的线粒体蛋
白浓度测定的预处理试剂盒和 YIJI Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒 GMS30030.1)
13.如果使用细胞或组织裂解悬液,则蛋白浓度为 50 微克/100 微升
14.样品特异活性是指鱼藤酮敏感的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸-辅酶 Q 还原酶,去除其它干扰因素(例
如复合物 II/III/IV 等)
15.线粒体呼吸链复合物 I(NADH-辅酶 Q 还原酶)单位活性定义为:在 30℃,pH 7.5 条件下,每分钟
内能够氧化 1 微摩尔还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)所需的酶量作为一个活性单位
16.本公司提供系列线粒体及其酶类技术产品
质量标准
1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定检测准确

 
D001阳离子交换树脂
大鼠5- 甲基胞嘧啶(5mC)试剂盒
牛肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒.
兔子脱氧胶原吡啶交联(dpd)elisa试剂盒
人戊糖素(pentosidine)elisa试剂盒
鱼嗜铬粒蛋白a(cga)elisa试剂盒
鸡巨肌酸激酶(mck)elisa试剂盒
小鼠骨特异性碱性磷酸酶BELISA检测试剂盒
基因组、RNA和蛋白分提试剂盒 (离心柱型)
113209-90-8/4-氯-5-氟-2-吡啶甲醇
公司名称:上海一基实业有限公司
电 话:021-60526763
传 真:021-58610291
联 系 人:罗婷
手 机:18717771011
详细地址:上海市张杨北路5972号
邮 编:200137
邮 箱:2851717386@qq.com
网 站:www.bqqt.tw
试剂盒
标准品
上海亨代劳商贸有限公司
实验试剂
科研仪器
主营产品:Elisa试剂盒,生物试剂,对照品,抗体,生物仪器,实验设备、ELISA试剂盒、细胞、血清、抗体、金标试剂盒、生物试剂、培养基。
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